RAW 264.7細胞復蘇

2024-10-16 要復蘇RAW264.7巨噬細胞，首先需要將含有1mL細胞懸液的凍存管從液氮中取出并快速解凍于37℃水浴中，然后將其轉移到1mL新鮮培養基的無菌管中，并ce底混合均勻。接下來，使用1000rpm的離心速度離心5分鐘，將上清液倒掉，隨后再加入1mL培養基并充分重懸細胞。將懸液加入含有適量培養基的培養皿或瓶中（10ml/10cm皿），并將其放置在培養箱中過夜培養（37℃，5%CO2）。第二天檢查細胞的生長狀態和密度，以確定是否需要進行傳代操作。通過這些步驟，可以有效地復蘇RAW26...

PCR-SBT基本原理

2024-10-15 1.PCR擴增PCR-SBT技術首先是對待測DNA進行PCR擴增，以擴增出分型區域。PCR，即聚合酶鏈反應，是一種在體外快速擴增特定DNA片段的方法。在PCR過程中，需要設計特定的引物，它們能夠與待擴增的DNA片段兩端互補結合。然后，在DNA聚合酶的作用下，以dNTP為原料，按照堿基互補配對的原則，合成新的DNA鏈。通過多次循環的變性、退火和延伸步驟，待測DNA片段得以大量擴增。在PCR-SBT技術中，為了擴增出HLA基因的多態性區域，通常需要設計多個引物對。這些引物對能夠覆...

三一造血人血小板裂解液說明書

2024-10-15 【產品名稱】中文名稱：三一造血人血小板裂解液英文名稱：HumanPlateletLysate(HPL)【貨號】RC-002【規格】100mL/瓶、500mL/瓶【性狀】本產品為橙黃色略渾濁的液體，久置或反復凍融后，渾濁現象更明顯，并有絮狀沉淀產生。【運輸條件】采用干冰冷凍運輸。【貯藏條件與有效期】-20°C保存即可，長期儲藏可置于-80°C條件下；建議收到本產品后，將本產品于4°C條件下放置過夜或37°C水浴0.5-1小時進行化凍，然后分裝凍存；利用本產品配制的wan全培養基...

感受態細胞制備原理與舉例

2024-10-14 一、感受態細胞即受體細胞通過理化方法處理，使其處于最適攝取和容納外來DNA的生理狀態的細胞。二、感受態細胞制備原理將快速生長的大腸桿菌置于經低溫0℃預處理的低滲氯化鈣溶液中，便會造成細胞膨脹（滲透作用），同時，Ca2+會使細胞膜磷脂雙分子層形成液晶結構，促使細胞外膜與內膜間隙中的部分核酸酶解離開來，離開所在區域，誘導細胞成為感受態細胞。大腸桿菌DH5α感受態細胞三、大腸桿菌DH5α感受態制備實驗步驟實驗步驟一從-80℃冰箱中取出保種的DH5α菌株，用滅菌的槍頭吸取少量保菌液加...

PCR的提出和發展

2024-10-14 一、起源PCR的發明人，一般認為是穆里斯(K.Mullis)，他也因此獲得了1993年的諾貝爾化學獎。穆里斯在好些寫作中，包括1990年在《科學美國人》上的一篇文章，及1998年的自傳《心靈luo舞》(DancingNakedintheMindField)，都曾提到PCR這個構想的起源。然而，PCR從構想到實現，真的就是穆里斯一人之功嗎?PCR究竟是在什么樣的環境下誕生的呢?穆里斯的出身是生物化學家，1972在加州大學伯克利分校取得博士學位，專長有機合成。一早他就表現出桀驁不...

單克隆抗體vs多克隆抗體

2024-10-14 單克隆抗體與多克隆抗體在多個方面存在顯著的區別，這些區別包括它們的來源、特性、應用以及生產方式等。盡管單克隆抗體和多克隆抗體在特異性、穩定性和生產方式等方面存在差異，但它們在許多情況下可以互補使用。一、定義與來源單克隆抗體：是指通過B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合形成的雜交瘤細胞系所產生的抗體。這種抗體是由單一的B細胞克隆產生的，因此具有高度均一性和特異性。它們通常是通過雜交瘤技術從動物細胞中獲得。多克隆抗體：則是從動物血清中獲得的抗體，屬于多種B細胞產生的混合物。這些抗體可以受到...

在基因操作中如何選用載體？

2024-10-12 ?在基因操作中選用載體的核心原則?是確保載體能夠滿足基因工程的基本要求，包括能夠在宿主細胞內穩定存在并復制、具有多個限制酶切點以便于目的基因的插入、帶有標記基因以便于篩選等?。圖為質粒構建基本流程在基因操作中選用載體的核心原則一?能夠自主復制?：確保載體在宿主細胞內能夠自我復制，從而增加目的基因的數量?。在基因操作中選用載體的核心原則二?遺傳標記物?：載體應具有兩個以上的遺傳標記物，便于重組體的篩選和鑒定?。在基因操作中選用載體的核心原則三?克隆位點?：載體應具有一個或多個特...

Transwell細胞遷移實驗注意事項

2024-10-12 Transwell細胞遷移實驗，也稱為Transwell遷移或侵襲測定實驗，是一種用于細胞生物學和分子生物學的實驗室技術，用于研究細胞通過多孔膜的運動。前面已經講過實驗步驟，那實驗過程中需要注意些什么呢？注意事項一基質膠在室溫下容易凝固，鋪膠過程全程需要在冰上操作。注意事項二基質膠濃度也是影響細胞遷移和侵襲的因素之一，所以基質膠的濃度和稀釋比例需根據供應商提供的信息和實驗具體情況調整，必要時可設置預實驗摸索最佳濃度和稀釋比例。一般常用濃度為1mg/mL。注意事項三鋪膠時，盡量...