Lipo 2000轉染步驟(24孔板)

一、Lipo 2000介紹

賽默飛Lipo2000轉染試劑是一種多功能轉染試劑，經證明可以將各種有效載荷有效地轉染到各種貼壁和懸浮細胞系中。

二、Lipo 2000轉染步驟

1.轉染前一天，胰酶消化細胞并計數(0.5-2x105)細胞鋪板，使其在轉染日密度為90-95%。細胞鋪板在0.5 ml含血清，不含抗生素的正常生長的培養基中。2.對于每孔細胞，使用50 ul無血清培養基(如OPTI-MEM I培養基)稀釋0.8-1.0ugDNA，輕輕混勻。

3.使用前將Lipofectamine 2000轉染試劑輕輕混勻，用50ul無血清培養基(如OPTIMEM I培養基)稀釋1-3 ul Lipofectamine 2000轉染試劑，輕輕混勻。Lipofectamine2000稀釋后，在5分鐘內同稀釋的DNA混合(<30分鐘)。NOTE:若使用DMEM培養基，則需在5分鐘內同稀釋的DNA混合。4.混合稀釋的DNA(第二步)和稀釋的Lipofectamine 2000(第三步)。室溫放置20分鐘。

5.(optional)將24孔板中的舊營養液吸出，用無血清培養基清洗兩次。加入0.5ml無血清配養基。

6.直接將復合物加入到每孔中，搖動培養板，輕輕混勻。

7.在37℃，5%CO2中保溫24-48小時。無需去掉復合物或更換培養基?；蛘咴?/span>4-5小時后更換培養生長基也不會降低轉染活性。

8.在細胞中加入復合物24-72小時后，分析細胞抽提物或進行原位細胞染色，檢測報告基因活性。這依賴于細胞類型和啟動子活性。對穩定表達，在開始轉染一天后將細胞傳代至新鮮培養基中，兩天后加入篩選抗生素。進行穩定表達需要數天或數周。貼壁細胞的穩定轉染:

轉染后24小時，將細胞以>1:10的比例傳代至新鮮培養基中，次日加入選擇性培養基。

三、Lipo2000購買渠道

賽默飛代理——天津益元利康生物科技有限公司，公司產品線涉及細胞與基因治療、免疫學、分子生物學、細胞生物學等多個方向，專注于生命科學試劑、耗材、細胞、儀器等產品銷售。