百奧益康人腦組織通用解離試劑盒使用指南

百奧益康人腦組織通用解離試劑盒該怎么使用呢？快來收看本期內容。

一、人腦組織通用解離試劑盒簡介

本產品適用于人腦組織的細胞懸液的分離制備,本產品利用酶溫和、快速有效地破壞細胞外基質，釋放細胞，從而生成單細胞懸浮液。制備的單細胞懸液可用于單細胞測序、細胞培養或其他細胞相關檢測。

二、人腦組織通用解離試劑盒使用說明

【使用方法】

準備工作:水浴鍋或雜交爐設置到37℃、配制含5%FBS的PBS新鮮組織約200mg(黃豆粒大小)，如圖1.

1.取一個5mL離心管，加入 2160μLBuferA,放入用 PBS 清洗干凈的組織樣本，并剪碎。

2.添加800μL的EnzymeB和10μ的Enzyme C，顛倒混勻。

3.放在 37℃水浴鍋或雜交爐中 20~30min。消化過程中,使用水浴鍋每隔3~5min 手動搖晃混勻，使用雜交爐轉速20~30轉/分鐘左右。

4.每隔3~5min質檢一次細胞懸液，根據細胞總量及活性等確定消化停止時間5.消化完成后，用 70 μm 細胞篩進行過濾，收集濾液于新的15 mL離心管中。6.加3mLRPMI1640培養基或5%FBS的 PBS 于消化的離心管中，上下顛倒涮洗管壁涮洗液同樣經過同一個 70μm 細胞篩進行過濾，收集濾液于第5步的15 mL 離心管中7.將收集液于4℃，300xg離心5min，棄上清

8.用5mL含5%FBS的PBS重懸沉淀，吹打混勻.

9.放入水平離心機，4℃，300xg離心5min，棄上清

10.用含5%FBS的 PBS 重懸沉淀至 2mL.

11.加入1mLDRS(細胞碎片去除緩沖液)，用5mL移液器緩慢吹打混勻10次。不要渦旋振蕩。

12.緩慢加入3mLPBS，輕輕覆蓋在最上層，千萬不要混勻，如圖2.

13.務必使用水平離心機，并設置為居中的加速度和減速度，4°℃，3000xg，離心 20 min

14.離心后，緩慢取出離心管。溶液分成3層。緩慢吸出全部上清液(優先吸出碎片層)保留細胞沉淀(上清盡量去除干凈)，如圖3和圖4.注:離心管要輕拿輕放，確保分層明顯，不同層的溶液間不互相混合

15.向沉淀中加人適當體積的含5%FBS的PBS,加人三倍體積的紅細胞裂解液(BA3311).

冰上裂紅5min。具體可以參考BA3311紅細胞裂解液說明書。

16.加入等體積的 PBS混勻，終止裂紅，4℃，450xg，離心5min，棄上清

17.用10mL含5%FBS的 PBS重懸沉淀，吹打混勻.

18.4℃，300xg離心5min，棄上清.

19.用50μL~2mL 含5%FBS的 PBS 重懸沉淀,根據所需的細胞濃度調整重懸液的體積。20.若有明顯細胞結團，則使用 20μm細胞篩進行過濾，收集濾液于新的離心管中。若無明顯細胞結團，則可跳過此步驟.

21.用細胞計數儀對細胞懸液進行質控并記錄，質控結束后請立即進行后續實驗。