怎樣純化抗體才能提高特異性？

一、抗體純化

為了提高特異性結(jié)合目標(biāo)抗原的免疫球蛋白濃度，抗血清、腹水或細(xì)胞上清需要進(jìn)一步純化以去除非目標(biāo)抗原免疫球蛋白和其它血清蛋白。無(wú)論是多克隆抗體還是單克隆抗體，純化方法的選擇至關(guān)重要，其中單克隆抗體需要根據(jù)抗體亞型來(lái)選擇合適的親和介質(zhì)或沉淀方法。多克隆抗體 一般選擇用抗原蛋白偶聯(lián)親和柱進(jìn)行特異性抗體收集。

二、怎樣純化抗體才能提高特異性？

目前常用的親和純化方式主要是抗原親和純化和 Protein A 或 G 純化。

1.抗原親和純化

抗原親和純化是基于抗原 - 抗體可逆結(jié)合的特性產(chǎn)生的一種純化免疫球蛋白的方法，通過(guò)交聯(lián)到樹(shù)脂上的抗原，純化出與抗原有特異性反應(yīng)的抗體，這一純化方法大量的去除了非特異性的免疫球蛋白成分，得到的抗體特異性更高。

2.Protein A 或 G 純化

Protein A 或 G 純化是利用金黃色葡萄球菌的蛋白 A(Protein A) 或鏈球菌的蛋白 G(Protein G)  對(duì)免疫球蛋白 Fc 段的高親和性，從抗血清中去除血清蛋白，這一方法無(wú)法去除非特異性免疫球蛋白。

3.兩種方式區(qū)別

用 Protein A 或 G 純化的多抗通常會(huì)有交叉反應(yīng)，在實(shí)驗(yàn)中可能產(chǎn)生背景、雜信號(hào)甚至假陽(yáng)性。

采用抗原親和純化，雖然得率較 Protein A 或 G 純化的低，但抗體特異性得到很大提高。

單克隆抗體大部分采用 Protein A 或 G 的純化方法，因?yàn)樾∈蟾顾煞直瓤寡搴?jiǎn)單且雜抗體含量比例小，采用這一方法得到的單抗?jié)舛雀咔姨禺愋圆皇芨蓴_。

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