磷酸化蛋白研究方法之wako預(yù)制膠

磷酸化蛋白對(duì)細(xì)胞通路的重要性毋庸贅述，這種關(guān)鍵的翻譯后修飾參wako預(yù)制膠與wako預(yù)制膠廣泛的細(xì)胞活動(dòng)調(diào)節(jié)，包括細(xì)胞周期、細(xì)胞分化、代謝和神經(jīng)元通訊等。蛋白磷酸化的異常也與眾多疾病相關(guān)，是疾病機(jī)理研究的重要研究方向。那么你知道磷酸化蛋白研究方法嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

    Western Blot是評(píng)估蛋白磷酸化狀態(tài)的常用方法，且大部分實(shí)驗(yàn)室具備開(kāi)展該實(shí)驗(yàn)的條件。用SDS-PAGE分離生物樣品，隨后轉(zhuǎn)移到膜（PVDF或硝酸纖維素膜），采用磷酸化抗體鑒定目的蛋白的磷酸化水平。

    由于磷酸化蛋白的檢測(cè)結(jié)果可能隨樣本處理或操作誤差而變化，研究人員通常用同一種蛋白的總表達(dá)水平作為參考，通過(guò)確定磷酸化蛋白和總蛋白的相對(duì)比值來(lái)反映磷酸化情況，判斷信號(hào)通路是否被激活。

    SuperSep™Phos-tag™是一種預(yù)制膠，預(yù)先加入50μmol/L的Phos-tag™Acrylamide，打開(kāi)包裝即可直接使用。預(yù)制膠中含有Zn2+作為金屬離子，在中性凝膠緩沖液中保存穩(wěn)定性很好，得到的結(jié)果條帶也很整齊。wako預(yù)制膠即開(kāi)即用，使用起來(lái)安全可靠，有效期長(zhǎng)達(dá)6個(gè)月，操作方法與普通無(wú)二。

SuperSep™Phos-tag™預(yù)制膠的應(yīng)用

電泳條件：30mA(恒流),60 min

樣品：5μg/Laneα-酪蛋白(含磷酸化與去磷酸化a-酪蛋白)

普通SDS-PAGE只觀察到一條條帶，而Phos-tag™ SDS-PAGE里可見(jiàn)α酪蛋白磷酸化和α-酪蛋白去磷酸化兩條條帶。

樣品緩沖液：Sample Buffer Solution(2ME+)(X4)

電泳緩沖液：SDS-PAGE緩沖液，pH8.5

染色：QUICK-CBB PLUS

  P10%(左):SuperSep Phos-tag™(50 μmol/L),10%,13 well

  P15%(中):SuperSep Phos-tag™(50 μmol/L),15%,13 well

  A15%(右):SuperSep™ Ace,15%,13well(不含Phos-tag™)

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