保存蛋白質(zhì)的原則及方法有哪些？

在完成蛋白質(zhì)純化后，如果保存不當(dāng)，容易發(fā)生失活和變性的情況，那么你知道保存蛋白質(zhì)的原則及方法有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！

一、原則

1. 低溫

保存蛋白質(zhì)時(shí)，確保在低溫條件下至關(guān)重要。低溫意味著較低的能量水平，有助于減緩蛋白質(zhì)分子內(nèi)部的熱運(yùn)動，減少鍵的斷裂可能性。此外，在低溫下，微生物繁殖減緩，潛在的蛋白酶活性降低，從而有助于維持蛋白質(zhì)的活性。

2. 無菌

在進(jìn)行蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)操作時(shí)，務(wù)必佩戴手套。盡管實(shí)驗(yàn)室戴手套通常是為了保護(hù)實(shí)驗(yàn)者自身，但在生化實(shí)驗(yàn)中，蛋白質(zhì)是我們需要保護(hù)的主體。我們皮膚上存在一些蛋白酶，可能會降解蛋白樣品。此外，皮膚上的其他化學(xué)物質(zhì)也可能污染蛋白樣品。為了防止細(xì)菌生長，最好將蛋白質(zhì)保存在經(jīng)過滅菌處理的容器中。

3. 濃度

為了提高蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性，建議以較高濃度保存重組蛋白質(zhì)，最好保持在1mg/ml以上。高濃度有助于防止蛋白質(zhì)分子附著在塑料或玻璃管壁上。不容忽視的是，疏水性蛋白質(zhì)容易附著在管壁上。

4. 分裝

蛋白質(zhì)需要冷凍保存，但在實(shí)驗(yàn)中常在室溫或更高溫度使用。反復(fù)凍融過程中產(chǎn)生的冰晶會損害蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和構(gòu)象。為減少凍融次數(shù)，建議將純化后的蛋白質(zhì)進(jìn)行分裝保存，每次使用前融化所需量，以確保蛋白質(zhì)樣品經(jīng)歷單次凍融。

二、保存

1. 長期保存

對于凍干狀態(tài)的重組蛋白，由于處于wan全脫水的狀態(tài)，在不受潮的情況下可以在冰箱中保存數(shù)年。

對于復(fù)融后的重組蛋白，比較合適的保存方式是分裝后保存在 -20°C 或 -80°C，六個月內(nèi)一般是沒有問題的。

（1）分裝有助于zui大程度減少反復(fù)凍融對抗體和重組蛋白活性的損害，并減少從同一管中多次吸取可能導(dǎo)致的污染。

（2）分裝的量最好按一次實(shí)驗(yàn)用完為準(zhǔn)，每份至少不能少于10 µl。體積越小，蛋白濃度受蒸發(fā)和管壁吸附影響的可能性越大。

（3）復(fù)融后的分裝重組蛋白如果一次用不完，將剩余母液保存在 4℃，避免再凍起來。

（4）蛋白工作液應(yīng)當(dāng)在當(dāng)天配制并當(dāng)天使用，最好不要在4℃超過1天。

2. 短期保存

對于短期保存，大多數(shù)蛋白質(zhì)可以在4°C下保存，以避免反復(fù)凍融對活性的影響。然而，4°C保存面臨微生物污染的問題。因此，如果保存時(shí)間超過24小時(shí)，建議使用0.22微米的濾膜過濾樣品，然后在無菌管中保存。值得注意的是，并非所有蛋白質(zhì)都適合在4°C下保存。

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