WB、IP、IHC、IF、ChIP、FC六種抗體的區(qū)別是什么？

查詢抗體的時候，發(fā)現(xiàn)在抗體應用欄中，有的抗體適用于WB、IP、IHC、IF、F、CHIP，而有的抗體適用于WB、IHC、IF、F，不適用于IP和CHIP。那么你知道WB、IP、IHC、IF、ChIP、FC六種抗體的區(qū)別是什么？讓我們一起來看看吧！

一、WB

蛋白質印跡是生命科學實驗中一項常見的分子生物學實驗技術，原理為利用電泳（SDS-PAGE）分離蛋白質，接著將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測的方法，通過分析條帶大小和顯色信號獲得目標蛋白質在所分析的細胞或組織樣本表達情況的信息。由于蛋白質進行電泳前進行加熱變性，破壞了保持蛋白質二級和三級結構的氫鍵，并使蛋白質線性化，需使用識別線性抗原表位的抗體。因此WB抗體一般采用人工合成多肽作為抗原制備的抗體。

二、IF/IHC

免疫組化是利用標記抗體經(jīng)抗原抗體特異性免疫反應和化學/熒光呈色反應，對組織或細胞內的抗原進行研究的技術。免疫組化檢測需要進行固定，固定可防止細胞脫落，并盡量讓細胞的形態(tài)結構維持和天然狀態(tài)下一致，確保組織細胞抗原特異性的穩(wěn)定。但化學物質的固定使蛋白質變性凝固，與天然狀態(tài)下的蛋白質結構有一定的區(qū)別，但是又不同于WB中加熱變性變成線性的結構。

免疫組化抗體識別的是未經(jīng)加熱變性處理的抗原表位，有些表位是線性的，而有的屬于構象型；線性表位不受蛋白變性的影響，天然蛋白和變性后的蛋白都含有；構象型表位由于受蛋白空間結構限制，加熱變性會消失。因此在做IF/IHC實驗中，最合適的抗體可以是用重組蛋白作為抗原制備的抗體，也可以是人工合成多肽作為抗原制備的抗體。如果所用的抗體識別的是蛋白上連續(xù)的幾個氨基酸，也就是線性表位，那么這種抗體可同時用于免疫組化和WB，而如果抗體識別的是構象表位，則只能用于免疫組化。

三、IP/CHIP

免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）是利用抗原抗體特異性反應純化富集樣品中目的蛋白的一種方法。通常使目標蛋白同對應抗體-protein A/G形成免疫復合物沉淀而得以收集。根據(jù)不同種類的檢測目標，可以將IP技術分為：CHIP、RIP、Co-lP。IP富集蛋白，檢測與其結合的DNA的方法即為ChIP；檢測與其結合的RNA的方法即為RIP；檢測與其結合的蛋白的方法即為Co-IP。

免疫沉淀是用抗體去識別天然狀態(tài)下的蛋白質，因此IP的抗體最好使用天然蛋白作為抗原制備的抗體，也可以用重組蛋白作為抗原制備的抗體。最好不要用人工合成多肽作為抗原制備的抗體，因為這種抗體識別的位點可能包裹在蛋白內部而無法識別。CHIP和IP沒有太大的區(qū)別，唯yi的問題在于，如果抗體識別的抗原表位和該蛋白質與DNA結合的部位一致，則會導致CHIP實驗的失敗。

四、FC

流式細胞是以免疫熒光技術為基礎而發(fā)展起來的一種專門的細胞分析技術，主要用于細胞分析和分選。流式細胞中分為兩種，一種是活細胞的流式，這種流式最好采用天然蛋白作為抗原制備的抗體或者用重組蛋白作為抗原制備的抗體，另外一種是經(jīng)過固定之后的流式，和IF/IHC 所用抗體一致。

在流式細胞中，分為直接標記和間接標記，間接標記不如直接標記真實準確。因此選擇流式抗體要采用帶有熒光標記的一抗；如果研究的蛋白沒有直接標記的一抗，那么就采用間接標記抗體，需同時使用可識別靶標抗原一抗和偶聯(lián)熒光染色的二抗。

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