Trizol法提取RNA的注意事項(xiàng)與常見(jiàn)問(wèn)題有哪些？

Trizol法是目前普遍使用的RNA提取方法，那么Trizol法提取RNA有哪些注意事項(xiàng)和常見(jiàn)問(wèn)題呢？讓我們一起來(lái)看看吧！

一、Trizol法提取RNA的注意事項(xiàng)

在使用TRIZOL的時(shí)候要帶手套和眼罩，避免接觸到皮膚和衣服，使用化學(xué)通風(fēng)櫥，防止蒸汽吸入。

從少量樣品（1-10mg組織或102-104細(xì)胞）中提取RNA時(shí)可加入少許糖原以促進(jìn)RNA沉淀。例如加800ml TRIzol勻漿樣品，沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原會(huì)與RNA一同沉淀出來(lái)，糖原濃度不高于4mg/ml是不影響第一鏈的合成，也不影響PCR反應(yīng)。

勻漿后加氯仿之前樣品可以在-60至-70℃保存至少一個(gè)月。RNA沉淀可以保存于75%酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。

分層和RNA沉淀時(shí)也可使用臺(tái)式離心機(jī)，2600×g離心30-60分鐘。

預(yù)期產(chǎn)量：1mg組織或1×106細(xì)胞提取RNA分別為：

肝和脾6-10μg ,腎3-4μg ,骨骼肌和腦組織1-1.5μg ,胎盤1-4μg ,上皮細(xì)胞8-15μg ,成纖維細(xì)胞5-7μg。

二、Trizol法提取RNA的常見(jiàn)問(wèn)題

1. 得率低

（1）樣品裂解或勻漿處理不che底

（2）RNA沉淀未wan全溶解

2. OD260/OD280<1 .65

（1）檢測(cè)吸光度時(shí)，rna樣品沒(méi)有溶于水，而溶于了TE中

（2）樣品勻漿時(shí)加的試劑量太少

（3）勻漿樣品時(shí)未在室溫放置5分鐘

（4）吸取水相時(shí)混入了有機(jī)相

（5）RNA沉淀未wan全溶解。

3. RNA降解

（1）組織取出后沒(méi)有馬上處理或冷凍

（2）待提取RNA的樣品沒(méi)有保存于-60至-70℃,而保存在了-5至-20℃

（3）細(xì)胞在用胰酶處理時(shí)過(guò)度

（4）溶液或離心管未經(jīng)RNase去除處理

（5）電泳時(shí)使用的甲醛pH值低于了3.5

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