qPCR實驗的Ct值有什么作用？

qPCR擴增過程中，擴增產(chǎn)物的熒光信號達到設(shè)定的熒光閾值時的所對應(yīng)的擴增循環(huán)數(shù)（Cycle Threshold）。C代表Cycle，T代表Threshold。簡單講，Ct值就是qPCR中起始模板擴增達到一定產(chǎn)物量時，所對應(yīng)的循環(huán)數(shù)。那么你知道qPCR實驗中的Ct值有什么作用嗎？讓我們一起來看看吧！

一、指數(shù)擴增、模板量與Ct值的關(guān)系

理想情況下，qPCR中的基因經(jīng)過一定的循環(huán)數(shù)被指數(shù)擴增而積累，擴增循環(huán)數(shù)和產(chǎn)物量之間的關(guān)系是：擴增產(chǎn)物量=起始模板量×（1+En）循環(huán)個數(shù)。然而qPCR反應(yīng)并不是一直處于理想情況下，當(dāng)擴增產(chǎn)物量達到“一定產(chǎn)物量"時，此時循環(huán)個數(shù)為Ct值，處于指數(shù)擴增時期。Ct值與起始模板量的關(guān)系：模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在線性關(guān)系。起始模板量濃度越高，Ct值越小；起始模板量濃度越低，Ct值越大。

二、擴增曲線、熒光閾值與一定產(chǎn)物量

qPCR擴增產(chǎn)物量是以熒光信號的形式直接呈現(xiàn)，也就是擴增曲線。在PCR早期，擴增處于理想情況下，循環(huán)數(shù)較少，產(chǎn)物積累少，產(chǎn)生熒光的水平不能與熒光本底背景明顯地區(qū)別，之后熒光的產(chǎn)生增加進入指數(shù)期。可以在PCR反應(yīng)剛處于指數(shù)期的某一點上來檢測PCR產(chǎn)物的量，以此作為“一定產(chǎn)物量"，并且由此來推斷模板最初的含量。因此，一定產(chǎn)物量對應(yīng)的熒光信號強度，也就是熒光閾值。

在PCR的后期，擴增曲線不再呈現(xiàn)指數(shù)擴增，進入線性期和平臺期。

三、Ct值的重現(xiàn)性

PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期，此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性極hao，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。

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