哪些因素影響電轉效率？

電轉，也稱電穿孔法，是通過脈沖電流在細胞膜上打孔，將外源分子（DNA、RNA 、mRNA等）導入真核細胞內，來改變細胞的特性，從而達到改造細胞的目的，是實現細胞基因功能和蛋白質表達研究的重要工具。那么影響電轉效率的因素有哪些呢？讓我們一起來看看吧！

一、電轉過程

1）電轉的完整操作步驟包括電轉前操作，電轉執行和電轉后培養。在進行電轉前操作時，電轉試劑、細胞與轉染底物要進行混勻，如果混勻時過于激烈，會破壞轉染復合物的形成，從而導致轉染效率降低；
2）在進行電轉前操作時，電擊緩沖液的選擇也很重要，由于細胞對緩沖液的離子組成和滲透壓非常敏感，因此組分與細胞質類似的緩沖液有利于細胞電擊后的存活；

3）電轉執行時，需要控制電場強度和脈沖時間。適當提高電場強度或延長脈沖時間，能使底物更容易進入細胞，但細胞的死亡率也會增加。一般電場強度設置遵循低電場長時程的原則。如果選擇內置優化程序的電轉系統，如Lonza的Nucleofector系統，則可以節省摸索電場強度和脈沖時間的步驟。

4）轉染培養基中含有抗生素會影響細胞轉染效率，這是因為轉染試劑對細胞有損傷，這時培養基中的抗生素會進一步損傷細胞，因此我們建議使用不含抗生素的培養基或PBS；

5）電轉后培養要注意，如果使用傳統轉染試劑，轉染后4-6h后必須進行換液，否則會由于轉染試劑毒性而引起細胞死亡，最終影響轉染效率。

二、細胞狀態

1）細胞污染對細胞狀態的影響很大，受到細菌、真菌或支原體污染的細胞都會導致轉染效率降低、細胞死亡率增加，尤其是支原體污染悄無聲息，因此一定要做好定期的支原體檢測，確保細胞狀態；

2）細胞培養到不同密度都能用于電轉，但最hao的轉化效率是在細胞的對數生長期（15代以內，傳代后2d）。當細胞處于對數生長期時，有絲分裂較旺盛，表面結構密度比穩定期的細胞差，電轉后，細胞膜的恢復能力強，而且處于有絲分裂期的細胞更容易接受外源DNA。

三、轉染底物狀態

1）不同的轉染底物對轉染效率都會產生不同的影響，例如質粒DNA在大小、用量以及構象這三方面都影響著電轉效率，IRES導致轉染效率低，轉染mRNA需要調整洗滌次數等等；

2）轉染試劑與底物的配比，也會影響轉染效率，因此需要根據說明書或參考文獻來進行配比優化實驗，選用最佳配比濃度；

3）底物的內毒素，也會影響轉染效率，內毒素含量過高，會導致轉染過程中細胞狀態變差，從而增加細胞死亡率，降低轉染效率，因此要對內毒素進行控制。

影響電轉效率的因素有很多，總結下來有三方面：電轉過程、細胞狀態以及轉染底物狀態。只有了解影響電轉效率的因素有哪些，我們才能夠“對癥下藥"。更多有關影響電轉效率的因素問題，請聯系天津益元利康生物科技有限公司：