流式細(xì)胞分選抗體的常規(guī)處理方法

　　流式細(xì)胞分選是指將組織分散制成細(xì)胞懸液后從中獲取目的細(xì)胞的過(guò)程。細(xì)胞純化更進(jìn)一步強(qiáng)調(diào)從原代培養(yǎng)前成分混雜的異質(zhì)性細(xì)胞懸液中或者從培養(yǎng)物中獲得單一類型細(xì)胞的過(guò)程。通過(guò)細(xì)胞的分離和純化過(guò)程，使培養(yǎng)物成為單一類型培養(yǎng)物，甚至是遺傳特性*一致的培養(yǎng)物，后者即細(xì)胞系。許多情況下，細(xì)胞分離和純化并不是**的，培養(yǎng)物中只能達(dá)到以某種細(xì)胞為主的程度，所以也成稱為富集。

 

　　分離和純化細(xì)胞的過(guò)程不僅僅在原代培養(yǎng)之前進(jìn)行的，有時(shí)分離和純化細(xì)胞的過(guò)程還貫穿于原代培養(yǎng)和繼代培養(yǎng)的過(guò)程中，甚至是主要依賴培養(yǎng)過(guò)程實(shí)現(xiàn)分離和純化細(xì)胞的目的。培養(yǎng)物中細(xì)胞成分是否單一或者目的細(xì)胞在培養(yǎng)物中的比例如何，常是衡量某一培養(yǎng)工作是否成功的重要指標(biāo)。細(xì)胞分離純化的方法有密度梯度離心技術(shù)、逆流淘析分離技術(shù)、利用細(xì)胞表面標(biāo)志分離純化細(xì)胞的方法等。

 

　　流式細(xì)胞分選抗體的常規(guī)處理方法：

　　1、分選外周血，骨髓時(shí)：加抗凝劑，去紅細(xì)胞；

　　2、分選組織時(shí)，機(jī)械分離或膠原酶；

　　3、培養(yǎng)細(xì)胞，使用胰酶消化。

　　在實(shí)際細(xì)胞分離中，因?yàn)榱魇椒诌x的辦法價(jià)格相對(duì)比較昂貴，實(shí)驗(yàn)者一般都會(huì)采取別的方法分離細(xì)胞。下面列出來(lái)幾種其它細(xì)胞分離方法不能替代的情況，這些情況下必須進(jìn)行流式的細(xì)胞分選：

　　1、要求目標(biāo)細(xì)胞群有*的純度(95%-100%)；

　　2、需要分離低密度表面受體/抗原的細(xì)胞；（弱陽(yáng)性細(xì)胞)；

　　3、需要根據(jù)表面受體密度的差別來(lái)分離不同細(xì)胞；（根據(jù)免疫表型的分選，抗體親和力進(jìn)化等）；

　　4、需要依據(jù)多色熒光標(biāo)記來(lái)分選細(xì)胞；

　　5、根據(jù)某些細(xì)胞內(nèi)部標(biāo)志，如DNA含量、胞內(nèi)抗原等分離細(xì)胞；

　　6、多孔板分選。如單克隆分選，在96孔板每個(gè)孔中精確的分選進(jìn)1個(gè)細(xì)胞；

　　7、需要分選極低含量的細(xì)胞（如0.001%或更低）。流式可以分選出百萬(wàn)分之一的稀有細(xì)胞。